上海快3遗漏

明星产品
特色生化试剂
常规生化试剂
抗体
生化试剂
您的位置:网站上海快3遗漏 > 上海快3遗漏 > 免疫共沉淀Co-IP小能手!1个kit+1个神器帮您轻松搞定!

免疫共沉淀Co-IP小能手!1个kit+1个神器帮您轻松搞定!
点击次数:268 发布时间:2020-03-03

免疫共沉淀Co-IP是研究蛋白间相互作用的经典方法,其以抗体和抗原间的专一性作用为基础,通过偶联beads的Protein A/G与A蛋白及抗体复合物结合,进而将潜在的与A蛋白互作的B蛋白也沉淀下来。一般后续再对拿到的免疫复合物进行WB分析验证。
 

免疫共沉淀Co-IP本身的操作流程并不复杂,麻烦的是相关的操作步骤需要根据实验实际情况进行优化。辛辛苦苦忙活了好一阵子,你拿到的Co-IP结果很可能是这样的。
 

免疫共沉淀Co-IP的高背景和抗体污染(IgG交叉反应)问题相当令人头疼,以下是小爱整理给到您的优化建议:
 

1)针对非特异性作用的高背景

上海快3遗漏XIBAOLIEJIEWUZHONGCUNZAIDALIANGDANBAIZHI,KENENGHUIZAICAOZUOGUOCHENGZHONGFASHENGYUMUBIAOFUHEWUDEFEITEYIXINGJIEHE。ZHEIXIEFEITEYIXINGXIANGHUZUOYONGYIBANTONGGUOCHEDIQINGXIbeadsJIEHEDEMIANYIFUHEWULAIQINGCHU,DANYEKEYIYINGYONGQITACELVELAIYOUHUAFEITEYIXINGJIEHE,LIRU:

▲ 通过将盐浓度从120mM滴定至1000mM来改变缓冲液的离子强度;

▲ 减少一抗的使用量,直到信号干扰比;

▲ 参考我们推荐的操作步骤,进行细胞裂解物预清除。
 

2)针对抗体污染(IgG交叉反应)

MIANYIGONGCHENDIANCo-IPKANGTIWURANWENTISHIZAIWBFENXIZHONGLAIZIIPKANGTIIgGTIAODAIDEGANRAO(IPKANGTIYUWBKANGTITONGYUANSHIFASHENG),IgGDEQINGZHONGLIANZAI25kDHE50kDZUOYOU,BINGQIEZAISDS-PAGEZHONGKENENGHUIYOU<5kDDEPIANYI。ZHENDUIZHEIZHONGQINGKUANGKEYICAIYONGYIXIAJIZHONGFANGFAJINXINGYOUHUA:

▲ IP和WB采用不同来源抗体,IP为鼠源则WB可以选用兔抗;

▲ 采用特异性识别IgG轻链或者重链的二抗,如目的蛋白与IgG轻链接近、则可采用重链二抗;

▲ 运用交联剂将IP抗体和Protein A/G -Beads交联,通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白-抗体- Protein A/G-beads复合物,最后离心去除复合物,上清中只留下目的蛋白;

▲ WB分析前,可以考虑采用低pH洗脱来代替煮沸,低pH值(2-3)可以降低抗原/抗体相互作用、从而将抗原和抗体分离(如1M甘氨酸缓冲液,pH 2-3),注意电泳前需平衡pH;

▲ 将常用的融合标签(如GFP)掺入用于Co-IP主要靶蛋白中,选用优质特异性的抗融合标签抗体,有需要时还可将该抗体预固定以用于蛋白复合物纯化。
 

面对Co-IP的高背景和抗体污染,DIY是一种精神,不过我们更推荐1个kit+1个神器助您轻松搞定!
 

爱必信生物爆款热卖的abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒,选用优质Protein A/G 琼脂糖珠,超高性价比,验证良好的protocol,配套辅助试剂,一站式助力您的IP/CoIP实验!
 

除了这个高性价比免疫共沉淀Co-IP小能手kit,本期推荐的神器您必须了解一下——Chromotek家的GFP- Trap?!
 

GFP- Trap?建立在源自骆驼科家族(骆驼,单峰驼,无峰驼和羊驼)的抗体基础上,该类抗体通过VHH结构域结合抗原,化学结构稳定,且对抗原有高特异性及亲和性。对融合GFP的蛋白及其互作蛋白的验证及分离,GFP- Trap?绝对是理想的选择!
 

本期推荐的Co-IP小能手kit和神器相关产品全部现货,abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒限时3月促销中,订购信息如下:
 

  货号  品名  规格  优惠价
   abs955   免疫()沉淀(IP/CoIP)试剂盒   50tests   1960
   abs9146   PMSF   5g   336
   abs20035   Rabbit IgG   10mg   380
   abs20038   Mouse IgG   1mg   250
   abs926   WB solution base kit(rabbit)   1kit   735
   abs927   WB solution base kit(mouse)   1kit   735


以下产品由优宁维提供:
 

  货号  品名  规格  优惠价
   GTA-20   GFP-Trap?, coupled to agarose   500ul   3400



爱必信特色产品线全部现货)上海快3遗漏:二抗、标签抗体、对照抗体;WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;细胞因子、信号通路调节剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒;动植物提取物,定制服务(抗体/多肽/蛋白)...

 

上一篇 : 520,请接受小爱的“表白”    下一篇 :  爱必信提供全面的细胞凋亡(Apoptosis)信号通路相关抑制剂!
扫一扫访问手机站
访问手机站