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点击次数:59 发布时间:2020-08-17

PMA(TPA),佛波酯,16561-29-8

PMA(TPA)佛波酯是一种广泛用于体内外实验的佛波酯(phorbol ester) PKC激活剂。PMA结合PKC(Ki =2.6 nM)并激活其功能,在细胞和组织中都呈现出极其广的抑制谱。PMA可以抑制Fas诱导的细胞凋亡,但又可以诱导HL-60细胞的凋亡。PMA是一种高效的肿瘤促进剂,可以促进小鼠皮肤瘤的形成。尽管PMA毒性较强,但是在人体内仍显示出抗白血病和抗中性白细胞减少的活性。

图一. PMA结构图

体外研究 :为了检查PKC在p38MAPK磷酸化中的作用,用PKC活化剂PMA(100nM)刺激细胞,其模拟PKC的天然活化剂DAG与PKC的C1区的结合。在与αT3-1细胞中GnRH观察到的类似的两种细胞类型中观察到PMA的p38MAPK磷酸化,即缓慢的持续激活(分别在30分钟时为3.2倍和3.6倍)。由GnRH和PMA激活的PKC在p38MAPK磷酸化中起不同作用的矛盾发现可以通过PKC的差异定位来解释。 αT3-1细胞中p38MAPK磷酸化的基础,GnRH-和PMA-刺激是通过电压门控Ca2 +通道和Ca2 +动员的Ca2 +流入介导的,而在分化的LβT2促性腺细胞中,它仅通过Ca2 +动员介导[2]。 

体内研究:上海快3遗漏 PMA是PKC激动剂,其逆转由5-羟基癸酸(5-HD)诱导的损伤。因此,mitoKATP的激活通过PKC途径保护SOD和MDA中的线粒体功能[3]。

细胞实验:αT3-1和LβT-2细胞在补充有10%胎牛血清(FCS)和L-谷氨酰胺2mM,青霉素和链霉素(100单位/ mL)的DMEM中在37℃加湿培养箱中培养5%CO2培养。 C。在同一培养基中血清饥饿为0.1%FCS,持续16小时。然后如所示,将GnRH和PMA添加一段时间。通常,αT3-1细胞通过ExGen 500或jetPRIME瞬时转染,而LβT2细胞仅通过jetPRIME转染试剂转染。对于显性阴性(DN)PKC的实验,用1.5μgp38α-GFP和3μg对照载体,pCDNA3或3μgDN-PKC构建体转染αT3-1细胞(在6cm平板中)。对于LβT2细胞,用4μgp38α-GFP以及9μg对照载体,pCDNA3或9μgDN-PKC构建体进行转染(在10cm平板中)。转染后约30小时,将细胞血清饥饿(0.1%FCS)16小时,然后用GnRH或PMA刺激,用冰冷的PBS洗涤两次,用裂解缓冲液处理,然后进行一次冻融循环。收获细胞;离心(15,000×g,15分钟,4℃)后,取上清液进行免疫沉淀实验[2]。

动物实验:大鼠[3]所有实验均用雄性Wistar大鼠(体重250-280g)进行。将125只Wistar大鼠随机分成7组。 (1)假手术组(n = 21)给予侧脑室注射0.9%生理盐水; (2)IR组大鼠(n = 21)在大脑中动脉闭塞(MCAO)前30 min给予侧脑室注射0.9%生理盐水; (3)在MCAO前30分钟,给予Carbenoxolone(CBX)组(n = 21)大鼠侧脑室注射CBX(5μg/ mL×10μL); (4)在MCAO之前30分钟,给二氮嗪(DZX)组(n = 21)的大鼠腹侧注射DZX(2mM×30μL); (5)对5-HD组(n = 21)的大鼠进行5-HD(100mM×10μL)的侧脑室注射,10分钟后,在MCAO前15分钟注射DZX; (6)给DZX + Ro组大鼠(n = 15)注射DZX侧脑室,10分钟后,在MCAO前15分钟注射Ro-31-8425(400μg/ kg); (7)注射5-HD和DZX后,给5-HD + PMA组(n = 15)的大鼠腹膜内注射PMA(200μg/ kg)。 
 

参考文献 :
[1]. Xu F, et al. Protein kinase C-mediated Ca2+ entry in HEK 293 cells transiently expressing human TRPV4. Br J Pharmacol. 2003 Sep;140(2):413-21. 
[2]. Mugami S, et al. Differential roles of PKC isoforms (PKCs) and Ca2+ in GnRH and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulation of p38MAPK phosphorylation in immortalized gonadotrope cells. Mol Cell Endocrinol. 2017 Jan 5;439:141-154. 
[3]. Hou S, et al. Mechanism of Mitochondrial Connexin43's Protection of the Neurovascular Unit under Acute Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury. Int J Mol Sci. 2016 May 5;17(5). pii: E679. 
[4]. Zhang T, et al. MPTP-Induced Dopamine Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247. 

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 本文来源于网络

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